Шаг 4: Стерилизация агара

1. Поместите пробирки/бутылки, содержащие агар, в скороварку и стерилизуйте под давлением 1 атм. в течение 25 минут. В эти 25 минут не входит время, необходимое для достижения нужного давления в скороварке.

2. Дайте скороварке медленно остыть. Быстрый сброс давления может привести к интенсивному вскипанию агара в пробирках, выплёскиванию его через тампоны и колпачки пробки и к возможному заражению.

Шаг 5: Наклонное расположение пробирок

1. Протрите 10 % раствором хлорсодержащего отбеливателя стол, на котором будут расположены в наклоненном положении пробирки. Работу следует производить в помещении без сквозняков.

2. Надев кухонные варежки, расположите горячие пробирки на столе в наклоненном положении, положив пробирки одним краем на подходящий предмет. Предварительно стоит поэкспериментировать с деревянными брусочками или стопкой журналов для того, чтобы подобрать нужный угол наклона.

3. После желатинизации агара закройте плотнее колпачки. Готовые пробирки или бутылки следует хранить в прохладном, свободном от пыли месте. Покрытие из алюминиевой фольги предотвратит возможность заражения пробирок до их использования.

Методики стерильной работы с грибной культурой

После того, как агаровые пробирки остыли, самое время заняться разведением грибной культуры. Необходимые материалы:

• Скальпель или очень острый нож с тонким лезвием

• Спиртовка или пропановая горелка с баллончиком, зажигалка или спички (Прим. ред.: Вместо спиртовки лучше использовать "факел", просто налейте немного спирта на крышку металлической банки из-под растворимого кофе и подожгите его).

• Металлические консервные банки или штативы для пробирок с косым агаром и одна банка и штатив для хранения готовых пробирок

• Держатель для скальпеля или ножа (см. ниже примеры для самостоятельного изготовления)

• Микропористый бинт (такой, как в аптечках первой помощи, продается в аптеках) или обычный бинт (более дешевый вариант)

• Распылитель с раствором из 10 % хлорсодержащего отбеливателя и 90 % воды (необязательно)

• Свежее, чистое плодовое тело гриба или грибов (для начинающих микологов очень рекомендуется использовать вешенку)

Выберите место в доме, офисе или лаборатории, свободное от пыли и возможных источников плесени или грибков. Работы производите на устойчивом столе или стойке, предварительно вымыв поверхность теплой мыльной водой и вытерев насухо (для дополнительной защиты можно также обработать поверхность аэрозолем из 10 % раствора отбеливателя и вытереть затем насухо чистой тряпкой или бумажной салфеткой.) Закройте все окна, чтобы свести к минимуму циркуляцию воздуха (в идеале, постарайтесь перенести работы по культивированию на утренние часы, пока воздух чист от пыли, поднимаемой в воздух активными домочадцами).

Разложите все материалы в готовом для работы виде и в пределах удобной досягаемости. Поместите агаровые пробирки в металлическую консервную банку (банки) или штативы. Зажгите свет или включите светильник. Тщательно простерилизуйте лезвие скальпеля в пламени и положите скальпель на подставку. Подставку можно выгнуть из проволоки (например из старой вешалки), жестяной банки или другого подручного материала. Целью изготовления такой подставки является обеспечение устойчивого положения инструмента, чтобы его лезвие, пока оно не используется, находилось возле пламени во избежание заражения.

Для начала возьмите свежий, чистый гриб. Несмотря на то, что внешняя поверхность грибного тела может содержать бактерии и споры плесени, внутренняя ткань обычно свободна от организмов, вызывающих заражение, если только гриб не перенасыщен водой.

Оторвите или отломите часть гриба (не отрезайте с помощью ножа, потому что лезвие занесет инфекцию с внешних поверхностей). Положите гриб на стол чистой поверхностью вверх (эта поверхность не должна касаться стола). Цель тут состоит в том, чтобы получить чистую, открытую поверхность, от которой может быть отделен очень небольшой кусочек грибной ткани, а сам кусочек оставался бы, насколько это возможно, нетронутым, пока не будет помещен в пробирку.

Сейчас вам нужно расположить рабочие материалы так, чтобы пробирка, пока вы помещаете в нее кусочек грибной ткани, как можно меньшее время оставалась открытой. Для того, чтобы вероятность заражения была минимальна, недопустимо класть пробирку или пробку на стол. Этот момент представляет некоторую сложность. Будет полезно сперва попрактиковаться с пустой пробиркой перед тем, как использовать "боевую" пробирку с агаром и грибную ткань. Дальнейшие указания подразумевают, что вы — правша. Если нет, то все придется делать в зеркальном порядке.