Подвижность сперматозоидов. Пробирку с образцом спермы следует незамедлительно поместить в теплую воду. Каплю материала наносят на подогретое предметное стекло, покрывают другим и немедленно помещают под микроскоп со 100-кратным увеличением для определения поступательного движения сперматозоидов. Если первая и вторая фракция собраны вместе, первая фракция может отрицательно влиять на подвижность сперматозоидов, поэтому сперму разбавляют в соотношении 1:1 0,9 % цитратнымили фосфатным буферным раствором при температуре 37 °C, после разбавления отмечается улучшение подвижности сперматозоидов.

Концентрация спермы. Полное исследование предполагает подсчет общего количества сперматозоидов в эякуляте, однако то, что концентрация спермы низкая, обычно становится очевидным уже после первичного исследования. Количество спермиев может варьировать в разных образцах в зависимости от наличия простатической фракции. Многие исследователи часто ограничиваются сбором только второй фракции эякулята, прекращая процедуру перед выделением третьей фракции. По разным причинам, к которым относится и неопытность оператора, первую и вторую фракцию обычно получают вместе, поэтому концентрация спермы напрямую зависит от метода, которым ее собирают. Для оценки фертильности вычисляют общее количество сперматозоидов в эякуляте. Его легко установить, подсчитав число сперматозоидов в капле и пересчитав этот результат на общий объем эякулята. В этом случае получают объективный результат, не зависящий от метода получения спермы.

Для более точного определения на практике используют набор для разведения крови 1/100 для подсчета лейкоцитов и гемоцитометр Нейбауера. Берут 20 мкл разведенной спермы (разводят как кровь для подсчета лейкоцитов) и помещают в камеру гемоцитометра. Количество клеток в центральном квадратном миллиметре умножают на 106 и на объем спермы, получают число сперматозоидов в эякуляте. Суточную продукцию спермы определяют, собирая сперму ежедневно в течение 5 дней до стабилизации количества сперматозоидов, т. е. до истощения внегонадного резерва. У здорового фертильного кобеля она составляет примерно 400 х 106 сперматозоидов за 5 дней.

Морфология сперматозоидов. Для проведения исследований готовят мазок образца спермы на предметном стекле по аналогии с мазком крови. После высыхания мазок окрашивают в течение 5 минут эозин-нитрозином, анилиновым синим или кристаллическим фиолетовым и изучают под микроскопом при 1000-кратном увеличении в иммерсионной среде. Чтобы дать заключение, подтверждающее наличие или отсутствие морфологических дефектов спермы, необходимо исследовать как минимум 100 сперматозоидов.

Лейкоциты. Чтобы определить число лейкоцитов в микролитре, подсчитывают их количество в четырех угловых квадратах гемоцитометра и умножают полученную цифру на 250. При подозрении на инфекцию необходим дифференцированный подсчет лейкоцитов.

Посев спермы. Если цитология эякулята дает основания предполагать наличие инфекции, проводят бактериологическое исследование семени и секрета предстательной железы.

Объем и рН эякулята. Определяют оба показателя.

Определение щелочной фосфатазы в сперме. Щелочная фосфатаза вырабатывается в придатке семенника и присутствует в сперме здорового кобеля. Низкая концентрация или отсутствие фирмента указывает на неполную эякуляцию или двустороннюю обструкцию придатков или семяпровода.

Характеристики эякулята здоровых кобелей приведены в табл. 8.1.

Незначительные отклонения от нормы не свидетельствуют о бесплодии. Иногда результат, неудовлетворительный по одному параметру, компенсируется превосходными показателями по другому, т. е. кобель со сниженной по сравнению с нормой концентрацией спермы может использоваться в качестве производителя благодаря повышенной подвижности сперматозоидов. В случае первичного бесплодия или неясностей в диагнозе рекомендуется провести повторный анализ спермы. Повторный сбор эякулята следует производить через 2 месяца после первого исследования, поскольку за этот период происходит переход к новому циклу сперматогенеза.

В связи с тем, что секреция многих гормонов носит импульсный характер, к интерпретации единичных анализов следует подходить с осторожностью. Многие заболевания, предполагающие эндокринологическое исследование, неизлечимы, поэтому необходимо принимать во внимание затраты на его проведение. Кроме того, дополнительные расходы могут возникать в связи с обращением в неспециализированные лаборатории, проводящие исследование в порядке исключения.

Приведенный ниже протокол поможет выявить источник эндокринной дисфункции.